关于基因测序的几个问题！

1. 关于基因测序的几个问题！

DNA测序原理和方法 

DNA序列测定分手工测序和自动测序，手工测序包括Sanger双脱氧链终止法和Maxam-Gilbert化学降解法。自动化测序实际上已成为当今DNA序列分析的主流。美国PE ABI公司已生产出373型、377型、310型、3700和3100型等DNA测序仪，其中310型是临床检测实验室中使用最多的一种型号。本实验介绍的是ABI PRISM 310型DNA测序仪的测序原理和操作规程。

【原理】  ABI  PRISM 310型基因分析仪(即DNA测序仪)，采用毛细管电泳技术取代传统的聚丙烯酰胺平板电泳，应用该公司专利的四色荧光染料标记的ddNTP(标记终止物法)，因此通过单引物PCR测序反应，生成的PCR产物则是相差1个碱基的3'末端为4种不同荧光染料的单链DNA混合物，使得四种荧光染料的测序PCR产物可在一根毛细管内电泳，从而避免了泳道间迁移率差异的影响，大大提高了测序的精确度。由于分子大小不同，在毛细管电泳中的迁移率也不同，当其通过毛细管读数窗口段时，激光检测器窗口中的CCD(charge-coupled device)摄影机检测器就可对荧光分子逐个进行检测，激发的荧光经光栅分光，以区分代表不同碱基信息的不同颜色的荧光，并在CCD摄影机上同步成像，分析软件可自动将不同荧光转变为DNA序列，从而达到DNA测序的目的。分析结果能以凝胶电泳图谱、荧光吸收峰图或碱基排列顺序等多种形式输出。

它是一台能自动灌胶、自动进样、自动数据收集分析等全自动电脑控制的测定DNA片段的碱基顺序或大小和定量的高档精密仪器。PE公司还提供凝胶高分子聚合物，包括DNA测序胶(POP 6)和GeneScan胶(POP 4)。这些凝胶颗粒孔径均一，避免了配胶条件不一致对测序精度的影响。它主要由毛细管电泳装置、Macintosh电脑、彩色打印机和电泳等附件组成。电脑中则包括资料收集，分析和仪器运行等软件。它使用最新的CCD摄影机检测器，使DNA测序缩短至2.5h，PCR片段大小分析和定量分析为10～40min。

由于该仪器具有DNA测序，PCR片段大小分析和定量分析等功能，因此可进行DNA测序、杂合子分析、单链构象多态性分析(SSCP)、微卫星序列分析、长片段PCR、RT-PCR(定量PCR)等分析，临床上可除进行常规DNA测序外，还可进行单核苷酸多态性(SNP)分析、基因突变检测、HLA配型、法医学上的亲子和个体鉴定、微生物与病毒的分型与鉴定等。

【试剂与器材】

1．BigDye测序反应试剂盒  主要试剂是BigDye Mix，内含PE专利四色荧光标记的ddNTP和普通dNTP，AmpliTaq DNA polymerase FS，反应缓冲液等。

2．pGEM-3Zf (+) 双链DNA对照模板  0.2g/L，试剂盒配套试剂。

3．M13(-21)引物  TGTAAAACGACGGCCAGT，3.2μmol/L，即3.2pmol/μl，试剂盒配套试剂。

4．DNA测序模板  可以是PCR产物、单链DNA和质粒DNA等。模板浓度应调整在PCR反应时取量1μl为宜。本实验测定的质粒DNA，浓度为0.2g/L，即200ng/μl。

5．引物  需根据所要测定的DNA片段设计正向或反向引物，配制成3.2μmol/L，即3.2pmol/μl。如重组质粒中含通用引物序列也可用通用引物，如M13(-21)引物，T7引物等。

6．灭菌去离子水或三蒸水。

7．0.2ml或和0.5ml的PCR管  盖体分离，PE公司产品。

8．3mol/L 醋酸钠(pH5.2)  称取40.8g NaAc·3H2O溶于70ml蒸馏水中，冰醋酸调pH至5.2，定容至100ml，高压灭菌后分装。

9．70%乙醇和无水乙醇。

10．NaAc/乙醇混合液  取37.5ml无水乙醇和2.5ml 3mol/L NaAc混匀，室温可保存1年。

11．POP 6测序胶  ABI产品。

12．模板抑制试剂(TSR)  ABI产品

2. 第二代基因测序的意义

基因测序工作的最新工作和进展与其他的商业价值

3. 基因测序的主要功能

基因测序只是基因检测的方法之一，其又叫基因谱测序，是国际上公认的一种基因检测标准。 基因测序广为人知的还有针对唐氏综合征筛查的无创产前基因检测。只需要孕妇5毫升血，通过化验血液中甲型胎儿蛋白（AFP）、人类绒毛膜促性腺激素（β-hCG）的浓度，就可以算出胎儿出现唐氏综合征的危险性。 最近公众关注的H7N9，就是中国科学家通过基因测序等技术手段，发现的一种新型重配禽流感病毒。 近年间，基因测序从实验室走入临床，甚至逐渐成为全球医学界热门的话题。其中一个很重要的原因，是“名人效应”，苹果公司创始人乔布斯和影星安吉丽娜·朱莉都曾采用基因测序方法希望抵御癌症的侵袭，朱莉还为此预防性地切除自己的乳房。乔布斯虽然仍因癌症去世，但他生前接受的全基因测序，已成为很多国家富人追捧的高端体检服务。

4. 为什么要对自己的基因组测序

为什么要对自己的基因组测序
理论上说，知道了序列，就可以确定这个人的基因，从而能够知道这个人的表型特征，或者对那些病是易感的，以后有可能得什么病，以及对将来对孩子的遗传等等…
但目前来说，个人的全基因组还没有什么用，因为现在我们对基因组中序列的信息了解的还太少，如SNP相关疾病，多基因遗传病等。在科研上全基因组测序，可以为我们提供数据库，以便分析相关的特征。
随着代号为AK1的韩国人的测序成功,目前世界上只有5个人进行了，全基因组测序，另外四个是：一名非洲优鲁巴人、基因研究的先驱詹姆斯·沃森、克里格·文特和一名代号为YH的中国人。

5. 基因测序与基因检测的区别

基因测序是测出DNA上的碱基是A,C,G,T中的哪一个;
而基因检测是通过杂交或测序等方法来确定DNA序列中是否含有特定的一段序列，来明确相关的基因某些功能。比如耳聋基因检测就是用芯片来检测一个正常人是否携带隐性先天性耳聋基因或者药敏性耳聋基因。
测序只是得到DNA的序列，而检测是最终要跟功能建立联系。

6. 基因测序的产生背景

史蒂夫·乔布斯曾接受过全基因测序基因测序，本是一种实验室研究技术手段，因“名人效应”应用于高端体检、产前诊断等领域，价格不菲。基因测序最广为人知的，是影星安吉丽娜·朱莉通过基因检测，选择手术切除乳腺以降低患乳腺癌风险。2011年去世的苹果公司创始人史蒂夫·乔布斯患癌时，也曾接受过全基因测序。基因测序挽救两兄妹1996年，一对双胞胎出生了，男孩叫诺亚，女孩叫艾丽西斯。然而，他们的行为举止与别的孩子有所不同。从回到家的那天起，这对双胞胎就开始腹痛，并且一天要呕吐好几次。 在孩子们两岁的时候，他们被确诊为脑瘫。在精心的治疗和护理之下，这对双胞胎的病情似乎得到了控制。然而，5岁半的时候，双胞胎的病情又开始恶化。女孩艾丽西斯的眼珠开始上翻，手也无法正常下垂；男孩诺亚则是一天24小时地不断呕吐。他们甚至无法像正常人一样走路、说话。 此后，双胞胎的病情又几次反复，一直没有找到能治愈他们的方法。 2003年，机缘巧合，这对双胞胎和他们的哥哥以及父母进行了一次基因测序。经过对比分析，最终发现双胞胎致病的罪魁祸首是体内一种还原酶发生了基因突变。它破坏了产生多巴胺以及其他两种神经递质的细胞途径。 找到病因后，医生立刻做出了精确的治疗方案。一个月后，这对双胞胎被治愈。让这对双胞胎重获健康的，便是来自于生命技术公司的基因测序技术。 与个体婴儿原始基因对比，锁定病变基因基因测序虽然并不是个陌生的名词，但是大家并没有将它与自己的生活联系到一起。实际上，便捷的基因测序对生活品质的提升大有裨益。 现阶段对于同一种疾病的基因筛查，主要为目前已知的疾病相关的公共突变基因筛查，而对于绝大多数人不是公共位点的突变基因，要通过基因检测查找出个体特异性基因突变的位点就非常困难。 对于寻找个体特异性的基因突变位点来说，将发病后的基因与个体婴儿原始的正常基因样本对比，是最简便，也是最快捷的找寻方法，对于个体一生来说，只有婴儿基因是未受到外界环境广泛影响的，因此，在婴儿出生时进行婴儿基因保存，在疾病发生时能利用基因测序技术，对比查找基因突变位点，帮助医生锁定病变基因。  本·拉登身份靠基因技术确认“除了人类的基因测序，测序仪还有很广泛的应用。”戴尔·帕特森说，比如医疗研究、法医鉴定、农作物研究、动物健康、食品安全等多个领域，都可以是测序仪大展拳脚的舞台。 在抓捕本·拉登时，测序仪就帮上了大忙。美国海军特种部队在巴基斯坦首都伊斯兰堡击毙了拉登。除了震惊之外，很多民众好奇美军是如何确定拉登的身份的。利用生命技术公司提供的基因测序技术，美军和美国中央情报局首先提取了拉登的DNA，然后再将DNA与来自拉登家人的DNA参照样本对比，最终确定了拉登的身份。

7. 基因测序流程中容易出现问题的技术环节

亲亲！您好，一份祝福，一份温馨，一份感动。怀有一颗感恩的心。生活则处处有感动！您的问题已收到，打字需要一点时间，还请您稍等一下，请不要结束咨询哦。您也可以趁着这点时间提供更有效的信息，以便我更好的为您解答。希望我的回答可以解决您的问题，马上为您整理答案请稍等片刻！【摘要】
基因测序流程中容易出现问题的技术环节【提问】
亲亲！您好，一份祝福，一份温馨，一份感动。怀有一颗感恩的心。生活则处处有感动！您的问题已收到，打字需要一点时间，还请您稍等一下，请不要结束咨询哦。您也可以趁着这点时间提供更有效的信息，以便我更好的为您解答。希望我的回答可以解决您的问题，马上为您整理答案请稍等片刻！【回答】
基因测序流程中容易出现问题的环节是在被测试当中的污染和被测的条件的交换当然也和所使用的检测方法的可以检测出的下限以及检测方案选择的检测位点或片段有关【回答】
感谢您的耐心等待。以上是我的全部回复.还有其它问题咨询吗？我可以继续为您解答哦 ~祝您生活愉快【回答】

8. 基因测序的介绍

基因测序是一种新型基因检测技术，能够从血液或唾液中分析测定基因全序列，预测罹患多种疾病的可能性，个体的行为特征及行为合理，如癌症或白血病，运动天赋，酒量等1。基因测序相关产品和技术已由实验室研究演变到临床使用，可以说基因测序技术，是下一个改变世界的技术1。